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離心是一種分離物質(zhì)的技術(shù),其涉及施加離心力。
根據(jù)顆粒的大小,形狀,密度,介質(zhì)粘度和轉(zhuǎn)子速度將顆粒與溶液分離。
離心原理
在溶液中,密度高于溶劑沉降物(沉淀物)的顆粒和比其輕的顆粒漂浮到頂部。
密度差異越大,移動速度越快。如果密度沒有差異(異種條件),顆粒保持穩(wěn)定。
為了利用密度的微小差異來分離溶液中的各種顆粒,重力可以用離心機提供的更強大的“離心力”代替。
離心機是一種設(shè)備,它使物體圍繞固定軸旋轉(zhuǎn)(將其旋轉(zhuǎn)成圓形),施加垂直于旋轉(zhuǎn)軸(向外)的潛在強力。
離心機使用沉降原理工作,其中向心加速度導致更密集的物質(zhì)和顆粒沿徑向向外移動。
同時,密度較小的物體會移位并移動到中心。
在使用樣品管的實驗室離心機中,徑向加速度導致更密集的顆粒沉降到管的底部,而低密度物質(zhì)上升到頂部。
低速離心機
大多數(shù)實驗室都有標準的低速離心機,用于重粒子的常規(guī)沉淀
低速離心機的高速度為4000-5000rpm
這些儀器通常在室溫下運行,無法控制溫度。
其中使用了兩種類型的轉(zhuǎn)子。
固定角度
搖擺桶。
用于紅細胞的沉降,直到顆粒緊密地包裝成顆粒并通過傾析分離上清液。
高速離心機
高速離心機用于更復雜的生化應用,轉(zhuǎn)子室的更高速度和溫度控制是必不可少的。
高速離心機的高速度為15,000 - 20,000 RPM
該儀器的操作員可以仔細控制敏感生物樣品所需的速度和溫度。
有三種類型的轉(zhuǎn)子可用于高速離心
固定角度
搖擺桶
垂直轉(zhuǎn)子
超速離心機
它是最復雜的工具。
超速離心機的高速度為65,000 RPM(100,000sxg)。
由于高速產(chǎn)生強烈的熱量,因此紡紗室必須冷藏并保持高真空。
它用于制備工作和分析工作。
差速造粒(差速離心)
這是最常用的離心方式。
將肝臟等組織在含有緩沖液的蔗糖溶液中均質(zhì)化32度。
然后將勻漿置于離心機中并在恒定的恒定離心力下旋轉(zhuǎn)。
一段時間后,在離心機底部形成沉淀物,稱為沉淀物,上覆溶液稱為上清液。
然后將上覆的溶液置于另一個離心管中,然后在進行的步驟中以更高的速度旋轉(zhuǎn)。
密度梯度離心
這種類型的離心主要用于凈化病毒,核糖體,膜等。
通過在離心管中在較高濃度下輕輕覆蓋較低濃度的蔗糖來產(chǎn)生蔗糖密度梯度
將感興趣的顆粒置于梯度的頂部并在超離心機中離心。
顆粒穿過梯度,直到它們的密度與周圍蔗糖的密度相匹配。
去除并分析該部分。
速率 - 區(qū)域密度 - 梯度離心
區(qū)帶離心也稱為帶式或梯度離心
它依賴于沉降系數(shù)的概念(即沉積物通過液體介質(zhì)的運動)
在該技術(shù)中,在試管中產(chǎn)生密度梯度,底部具有蔗糖和高密度。
將蛋白質(zhì)樣品置于梯度的頂部,然后離心。
通過離心,樣品中較快沉積的顆粒在較慢的顆粒之前移動,即樣品在梯度中分離為區(qū)域。
蛋白質(zhì)根據(jù)其沉降系數(shù)沉淀,并通過在管底部形成孔來收集餾分。
異構(gòu)離心
將樣品裝入具有梯度形成溶液的管中(在預先形成的梯度的頂部或下方,或與自形成梯度混合)
將生物樣品和銫鹽的溶液均勻地分布在離心管中并在超離心機中旋轉(zhuǎn)。
在離心力的影響下,銫鹽重新分布以形成從頂部到底部的密度梯度。
粒子移動到其浮子密度等于梯度和形成帶的部分的位置。也就是說,樣品分子移動到其密度等于梯度密度的區(qū)域。
這是一個“真正的”均衡程序,因為它取決于buoyant密度,而不是速度
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